Влияние адъювантов Montanide ISA 61 и Montanide ISA 50 Seppic Франция на антигенную активность. Преимущество Montanide ISA 61.
Преимущество Montanide ISA 61 – нового адъюванта фирмы.
В статье дана сравнительная оценка двух экспериментальных образцов семикомпонентной вакцины, изготовленных с адъювантами Montanide ISA 61 и Montanide ISA 50, Seppic, Франция по показателям: антигенная активность (на лабораторных и естественно восприимчивых животных); влияние на формирование колострального иммунитета у телят при вакцинации стельных коров, а также эффективность в условиях животноводческого хозяйства, неблагополучного по основным респираторным и кишечным заболеваниям телят вирусной этиологии.
Установлено, что образец вакцины на основе адъюванта Montanide ISA 61 отличался более высокой антигенной активностью по сравнению с аналогичном образцом на основе адъюванта Montanide ISA 50, индуцируя более высокий уровень синтеза поствакцинальных антител. Применение вакцины в условиях неблагополучного животноводческого хозяйства позволило снизить заболеваемость и смертность телят, при этом образец вакцины, изготовленный на основе масла Montanide ISA 61, Seppic, Франция оказался более эффективным.
В целом инактивированные вирусные антигены за счет своего строения являются гораздо более слабыми иммуногенами по сравнению, например, с бактериями. Поэтому второй, не менее важной составляющей любой инактивированной вакцины, помимо ее специфической (то есть антигенной) части, является адъювант, который должен обеспечивать значительное повышение антигенных и иммуногенных свойств вирусных компонентов препарата, стимулируя, образование длительного и напряженного поствакцинального иммунитета.
Воздействие адъюванта на антиген и организм животного имеет сложный и многогранный характер, разные адъюванты могут иметь разные механизмы действия и оказывать неодинаковое влияние на развитие поствакцинального иммунного ответа. Поэтому подбор эффективного и безопасного адъюванта для конкретной вакцины с учетом специфики входящих в ее состав антигенов всегда является актуальной задачей.
Материалы и методы исследования.
Получение антигенов вирусов, изготовление экспериментальных образцов, определение плотности и вязкости, постановку всех серологических реакций проводили на базе ООО «Ветбиохим» (г. Москва).
Антигенами при изготовлении экспериментальных образцов вакцины служили инактивированные вирусы КРС: инфекционного ринотрахеита (ИРТ), парагриппа-3 (ПГ-3), вирусной диареи (ВД), респираторно-синцитиальный вирус (РС), ротавирус (РВ), коронавирус (КВ) и аденовирус КРС I типа (АВ), выращенные в перевиваемой культуре клеток почки теленка MDBK. Все штаммы указанных вирусов и культура клеток являются производственными, принадлежат ООО «Ветбиохим», штаммы депонированы в государственной коллекции вирусов ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» (г. Москва, Россия).
В качестве адъювантов использовали коммерческие продукты Montanide ISA 61 и Montanide ISA 50 SEPPIC, Франция. Поскольку оба адъюванта предназначены для конструирования одного типа эмульсий (вода в масле), то и соотношение антигенной (вирусной) части и адъюванта в каждом экспериментальном образце было идентичным.
Эффективность образцов вакцины, изготовленных с адъювантами Montanide ISA 61 и Montanide ISA 50, изучали в животноводческом хозяйстве Московской области, неблагополучном по вирусным респираторным и кишечным инфекциям молодняка, использовав критерии: заболеваемость телят респираторными и кишечными инфекциями, смертность и вынужденная выбраковка в соответствующих группах. Кроме того, оценивали уровень колострального иммунитета у телят, полученных от коров, иммунизированных разными образцами вакцины.
Стельных коров иммунизировали двукратно с интервалом 20–21 сутки с таким расчетом, чтобы первая вакцинация приходилась за 55–61 сутки до отела. Вакцину вводили внутримышечно в дозе 3,0 мл.
Телят, полученных от вакцинированных коров, иммунизировали соответствующим экспериментальным образцом двукратно (первый раз в возрасте 7–8 суток, второй — через 21–22 дня) внутримышечно в дозе 2 мл (согласно проекту инструкции по применению вакцины).
Для оценки напряженности гуморального иммунитета в каждой группе животных (по 10 голов коров и телят) брали кровь: у коров — перед вакцинацией (Д0), непосредственно перед проведением второй вакцинации (I) и сразу после отела (II); у телят — через 48–72 часа после рождения. При этом отслеживали обязательную выпойку молозива телятам.
Специфические антитела к каждому вирусному антигену определяли в реакции нейтрализации, которую ставили микрометодом в 96-луночных полистироловых планшетах по стандартной методике, с рабочей дозой соответствующего вируса 100–300 ТЦД50/0,1 мл. Вируснейтрализующий титр сыворотки выражали как предельное ее разведение, ингибирующее развитие ЦПД вируса в 50% зараженных культур клеток.
Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами с использованием компьютерных программ Microsoft Office Excel 2007–2016 (США) и статистических онлайн-калькуляторов.
Результаты и обсуждение.
Динамическая вязкость образца вакцины на основе адъюванта Montanide ISA 61 составила 76,5, мПа, то есть в 2,4 раза меньше, чем у аналогичного образца, изготовленного на основе ISA 50 (183,3 мПа), что в свою очередь положительно влияет на такие характеристики, как текучесть готовой вакцины и удобство ее применения в хозяйствах.
У телят (образец вакцины на основе Montanide ISA 61) индуцировал более высокий уровень специфических антител к четырем антигенным компонентам после первой вакцинации и к пяти вирусным антигенам из семи после второй по сравнению с аналогичным образцом, содержащим адъювант Montanide ISA 50. При этом у животных, которым вводили образец плацебо, антител к вирусам инфекционного ринотрахеита, респираторно-синцитиальному вирусу, рота-, корона- и аденовирусу КРС I типа обнаружено не было.
Таким образом, выход телят в группе коров, для вакцинации которых использовали вакцину на основе Montanide ISA 61, составил 98%, а в группе животных, иммунизированных вакциной, содержащей Montanide ISA 50— 100%. Аналогичный показатель у коров, которым вводили образец плацебо, составил 94%.
Вакцинация стельных коров вызывала соответствующий иммунологический эффект, индуцируя в том числе синтез специфических антител, которые в последующем обеспечили формирование напряженного колострального иммунитета у телят.
У животных, вакцинированных образцом на основе адъюванта Montanide ISA 61, был зафиксирован более высокий уровень поствакцинальных антител у взрослых животных, соответственно, и у телят в этой группе уровень колостральных антител был выше, чем у животных, полученных от коров, для иммунизации которых использовали вакцину на основе Montanide ISA 50 (р < 0,05).
Оценка эффективности экспериментальных образцов в условиях хозяйства, неблагополучного по основным респираторным и кишечным инфекциям телят показала следующие результаты. В группе, где применяли вакцину, изготовленную с адъювантом Montanide ISA 61, Seppic, Франция заболеваемость телят составила 17,3%, смертность и вынужденная выбраковка — 2,3%. В группе, в которой животных иммунизировали вакциной на основе Montanide ISA 50, данные показатели составили 21,4% и 3,1% соответственно, а в группе отрицательного контроля (животным вводили образец плацебо) — 62,1% и 8,3%.
Таким образом, применение вакцины позволило снизить заболеваемость и смертность телят при включении в состав адъюванта Montanide ISA 61 Seppic, Франция в 3,59 и 3,61 раза, а при использовании вакцины на основе адъюванта Montanide ISA 50 Seppic, Франция - в 2,90 и 2,68 раза соответственно.
Выводы.
Экспериментальные образцы семикомпонентной инактивированной комбинированной вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота- и коронавирусной болезни и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота КОМБОВАКА, изготовленные с адъювантами Montanide ISA 61 и Montanide ISA 50, вызывают формирование напряженного гуморального иммунного ответа у лабораторных и естественно-восприимчивых животных.
При использовании образца вакцины, изготовленного на основе адъюванта Montanide ISA 61, уровень поствакцинальных вируснейтрализующих антител к подавляющему количеству антигенных компонентов, входящих в состав вакцины, был выше в опыте на телятах и стельных коровах. Уровень колостральных антител был выше в группе новорожденных телят, полученных от коров, вакцинированных данным экспериментальным образцом.
Эффективность применения вакцины на основе адъюванта Montanide ISA 61 Seppic, Франция в условиях животноводческого хозяйства, неблагополучного по основным респираторным и кишечным заболеваниям вирусной этиологии, была выше по показателям заболеваемости и смертности телят, которые на 4,1% и 0,8%, соответственно, были ниже, чем в группе животных, которых вакцинировали на основе Montanide ISA 50, Seppic, Франция и на 44,8% и 6% ниже, чем в группе животных, которым вводили образец плацебо.
При этом динамическая вязкость образца вакцины на основе адъюванта Montanide ISA 61 была в 2,4 раза меньше, чем у аналогичного образца, изготовленного на основе Montanide ISA 50, что в свою очередь положительно влияет на такие характеристики, как текучесть готовой вакцины и удобство ее применения.
* По материалам статьи журнала «Аграрная наука», №6-2024.